Этап 2

Резюме проекта, выполняемого в рамках ФЦП

«Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу»

по этапу № 2

Номер контракта: 14.N08.11.1036

Тема: «Доклинические исследования антикоагулянтного лекарственного средства на основе фукоидана»

Приоритетное направление: 4. Науки о жизни

Критическая технология: 4. Биомедицинские и ветеринарные технологии

Период выполнения: 2015–2017 гг.

Исполнитель: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Мурманский морской биологический институт Кольского научного центра российской академии наук (ММБИ КНЦ РАН)

Ключевые слова: доклинические исследования, инновационное лекарственное средство, антикоагулянт, фукоидан, фукус пузырчатый (Fucus vesiculosus), тромбоз, тромбофлебит

1. Цель исследования, разработки

Цель реализуемого проекта - доклинические исследования лекарственного средства растительного происхождения на основе водорослевого полисахарида фукоидана для лечения и профилактики тромбофлебитов и тромбозов вен нижних конечностей.

2. Основные результаты проекта

В ходе выполнения 2 этапа были проведены исследования специфической антикоагулянтной активности фармацевтической субстанции (ФС) фукоидан и изучение механизмов ее действия. В результате проведения экспериментов в условиях in vitro и in vivo были получены результаты, подтверждающие наличие у тестируемой субстанции фукоидан антикоагулянтной активности. В ходе исследования была проведена оценка влияния ФС фукоидан на активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), антиIIа- и антиХа активность и скорость агрегации тромбоцитов в сравнении с референтным препаратом Гепарин. Установлено, что ФС фукоидан дозозависимо удлиняет показатели ТВ, АЧТВ и ПВ. Субстанция ФС фукоидан, так же как и Гепарин, в большей степени влияет на внутренний путь свертывания (АЧТВ и ТВ), чем на внешний (ПВ), значительно увеличивает антиXа активность и снижает скорость агрегации тромбоцитов. В отличие от Гепарина субстанция ФС фукоидан не оказывает влияния на анти IIа активность. Субстанция ФС фукоидан влияет не только опосредованно, как и Гепарин, на фактор свёртывания крови Xа (фактор Стюарта-Прауэра)  через тромбин АТ III, но также субстанция ФС фукоидан влияет непосредственно на фактор Xa. Установлено, что наиболее вероятный механизм действия тестируемой субстанции – блокирующее действие на «внутренний» путь коагуляционного гемостаза, установленное в результате исследования in vitro и in vivo.

Разработан состав и технология получения готовой лекарственной формы (ГЛФ) в форме мази ФС фукоидана с содержанием действующего вещества 15%. Изучен процесс высвобождения фукоидана из разработанного состава мази препарата in vitro. Высвобождение фукоидана из разработанной лекарственной формы мазь описывается формулой Хигучи и определяется главным образом диффузией. Разработан лабораторный технологический регламент получения ГЛФ в форме мази на основе ФС фукоидан в соответствии с ОСТ 64-02-003-2002.

Разработан состав и технология получения готовой лекарственной формы (ГЛФ) в форме таблеток ФС фукоидана. Высвобождение фукоидана из разработанной лекарственной формы во всех случаях описывается уравнением кинетики первого порядка и определяется скоростью разрушения таблетки. Наиболее интенсивно высвобождение фукоидана протекает в кислой среде с рН 1,2 (имитирующей условия желудка) и воде с рН 5,7 (имитирующей условия верхних отделов тонкого кишечника). Разработан лабораторный технологический регламент получения ГЛФ в форме таблеток на основе ФС фукоидан в соответствии с ОСТ 64-02-003-2002.

Разработаны основные методики стандартизации готовых лекарственных форм (ГЛФ) в виде мази и таблеток на основе ФС фукоидан, получаемой из фукуса пузырчатого. Выполнена предварительная (частичная) валидация методик анализа ГЛФ в форме мази и таблеток ФС фукоидана в соответствии с современными требованиями. Получены удовлетворительные результаты по всем требуемым валидационным показателям.

Наработано необходимое количество опытных образцов ГЛФ в форме мази и таблеток ФС фукоидан надлежащего качества для проведения дальнейших исследований и доклинических испытаний. Произведена закладка опытных образцов готовых лекарственных форм ФС фукоидан в форме мази и таблеток на хранение для изучения стабильности в установленном порядке, с оформлением Актов.

Проведено экспериментальное исследование специфической фармакологической активности ГЛФ в форме мази ФС фукоидана, по результатам которого было сделано заключение, что лекарственный препарат обладает антикоагулянтными свойствами: при многократном нанесении увеличивал показатели АЧТВ и ТВ, проявлял дозозависимую ингибирующую активность в отношении активированного Х фактора свертывания (фактора Стюарта-Прауэра). Наиболее вероятный механизм действия ГЛФ в форме мази ФС фукоидан– блокирующее действие на «внутренний» путь коагуляционного гемостаза и на процесс формирования фибрина.

Проведено экспериментальное исследование специфической фармакологической активности ГЛФ в форме таблеток ФС фукоидан, по результатам которого было установлено, что лекарственный препарат обладает антикоагулянтными свойствами: достоверно удлиняет тромбиновое время (ТВ), аналогично референтному препарату Вессел Дуе Ф, проявляет ингибирующую активность в отношении активированного Х фактора свертывания (фактора Стюарта-Прауэра), сопоставимую с активностью референтного препарата Вессел Дуе Ф, по всем оцениваемым параметрам активность тестируемого препарата сопоставима с активностью референтного препарата Вессел Дуе Ф (сулодексид). Наиболее вероятный механизм действия готового лекарственного препарата на основе ФС фукоидан в форме таблеток– ингибирующее действие на фактор Ха и на образование фибрина.

В соответствии с календарным планом работ на 2 этапе за счет внебюджетных средств разработана фармакопейная статья предприятия на фармацевтическую субстанцию фукоидан. Проект фармакопейной статьи представлена отдельным документом «Фармакопейная статья предприятия (проект). Фукоидан субстанция, ангро» совместно с пояснительной запиской.